（5）復(fù)制原點(diǎn)：載體在受體細(xì)胞中復(fù)制的起點(diǎn) 。
3、基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程：（如右圖）
4、基因表達(dá)載體去向：
（1）留在受體細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制 。
（2）整合到受體細(xì)胞染色體DNA上 。
（三）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
1、轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程 。
2、 （1）受體細(xì)胞為植物細(xì)胞
①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→農(nóng)桿菌侵染植物（雙子葉植物受傷后產(chǎn)生酚類物質(zhì)，吸引農(nóng)桿菌進(jìn)入植物細(xì)胞）細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表達(dá) 。

②基因槍法：利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入到受體細(xì)胞中 。
③花粉管通道法：在植物受粉后，花粉管未愈合時(shí)，剪去柱頭，滴加含有目的基因的DNA 。
（2）受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞
顯微注射法：將含有目的基因的表達(dá)載體提純→從雌性動(dòng)物體內(nèi)取出卵（體內(nèi)或體外受精）→顯微注射→將注射了目的基因的受精卵經(jīng)早期胚胎培養(yǎng)一段時(shí)間后，移植到雌性動(dòng)物體內(nèi) 。
（3）受體細(xì)胞為微生物細(xì)胞
①原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)越性：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 。
②氯化鈣法(感受態(tài)細(xì)胞法)：Ca+處理細(xì)胞→感受態(tài)（易于吸收周圍的DNA分子）細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子 。
（四）目的基因的檢測(cè)與鑒定
1、分子水平檢測(cè)
（1）轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因
——DNA分子雜交技術(shù)
（在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做標(biāo)記，作為探針 。）
（2）目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA
——分子雜交技術(shù)
（3）目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)
——抗原-抗體雜交技術(shù)（原理：抗原抗體的特異性結(jié)合）
2、個(gè)體水平檢測(cè)
——例如：抗蟲接種實(shí)驗(yàn)
三、基因工程的應(yīng)用
（一）植物基因工程
1、抗蟲轉(zhuǎn)基因植物：從某些生物中分離出具有殺蟲活性的基因，將其導(dǎo)入作物中，使其具有抗蟲性 。用于殺蟲的基因主要是Bt毒蛋白基因（例如我國(guó)的抗蟲棉）、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因等 。
2、抗病轉(zhuǎn)基因植物：抗病轉(zhuǎn)基因植物所采集用的基因，使用最多是病毒外殼蛋白基因和病毒復(fù)制酶基因；抗真菌轉(zhuǎn)基因植物中可使用的基因有幾丁質(zhì)酶基因和抗毒素合成基因 。
3、抗逆轉(zhuǎn)基因植物：例如：抗寒、抗旱、抗除草劑等 。
4、利用轉(zhuǎn)基因改良植物品質(zhì)：（1）高賴氨酸含量的玉米 。（2）耐儲(chǔ)存的番茄 。
（二）動(dòng)物基因工程
1、提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度 。
2、改善畜產(chǎn)品的品質(zhì) 。
3、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物做器官移植的供體
4、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲取藥物：乳腺生物反應(yīng)器
（三）基因工程藥物：例如干擾素
（四）基因治療：把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的 。
四、蛋白質(zhì)工程的崛起
（一）蛋白質(zhì)工程的概念：
蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求 。
基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)工程理論上可以產(chǎn)生自然界不存在的蛋白質(zhì) 。

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