影響PCR擴增結(jié)果的因素
【影響PCR擴增結(jié)果的因素】1、引物:引物到用戶手頭前都是以干粉形式存在的 , 干粉很容易丟掉,引物溶解后可以測定一下OD , 將所有引物的濃度調(diào)整到一致 , 對實驗有一定幫助 。
2、高溫聚合酶:高溫聚合酶是非常穩(wěn)定的,除非有蛋白酶的污染 。但是不同公司提供的酶擴增是有差異的,活性定量和標示未必相同 。選用表現(xiàn)一貫穩(wěn)定的酶,而不是最便宜的 。
3、緩沖液:緩沖液一般不容易出問題,只是使用前需要徹底融化混勻使用 。
4、溫度:變性和退火溫度是主要需要考慮的 。
5、模板:PCR 的關(guān)鍵之一,模板不是越多越好 。
6、dNTP: dNTP是PCR擴增體系中最不穩(wěn)定的 , 反復凍融會使dNTP發(fā)生降解 。
7、Mg2+:是TAQ活性所必須的,濃度過高過低對反應都有比較大的影響 。過低,合成效率會下降,過高,非特異性會加大 。
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