3.聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于蛋白質(zhì)定量 。
電泳后的凝膠經(jīng)凝膠掃描儀掃描,從而給出定量的結(jié)果.凝膠掃描儀主要用于對樣品單向電泳后的區(qū)帶和雙向電泳后的斑點進(jìn)行掃描 。
4.瓊脂或瓊脂糖凝膠免疫電泳
可用于①檢查蛋白質(zhì)制劑的純度;②分析蛋白質(zhì)混合物的組分;③研究抗血清制劑中是否具有抗某種已知抗原的抗體;④檢驗兩種抗原是否相同 。
結(jié)果檢測
對于不同的目的,應(yīng)采用不同的檢測方法 。用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復(fù)合物是電泳后檢測最常用的方法 。
Tips:SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果不正常現(xiàn)象和對策
1.指示劑前沿呈現(xiàn)兩邊向上或向下的現(xiàn)象 。向上的”微笑”現(xiàn)象說明凝膠的不均勻冷卻,中間部分冷卻不好,所以導(dǎo)致凝膠中分子有不同的遷移率所致 。這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時常發(fā)生 。向下的”皺眉”現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時電泳槽的裝置不合適引起的,特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的”三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會產(chǎn)生這種現(xiàn)象 。
2.”拖尾”現(xiàn)象是電泳中最常見的現(xiàn)象 。這常常是由于樣品溶解不佳引起的,克服的辦法是在加樣前離心,選用合適的樣品緩沖液和凝膠緩沖液,加增溶輔助試劑 。另一方法是降低凝膠濃度 。
3.”紋理”現(xiàn)象常常是由于樣品中不溶顆粒引起的,克服辦法是增加溶解度和離心除去不溶性顆粒 。
4.蛋白帶偏斜常常是由于濾紙條或電極放置不平行所引起的,或由于加樣位置偏斜而引起 。
5.蛋白帶過寬,與鄰近蛋白泳道的蛋白帶相連,這是由于加樣量太多或加樣孔泄漏引起的 。
6.蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的 。雖然梯度凝膠可以提高分辨率,但與其他方法相比,常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法 。為了提高分辨率,不要加過多的樣品,小體積樣品可給出窄帶 。加樣后應(yīng)立即電泳,以防止擴(kuò)散 。選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離 。通??拷把氐牡鞍讕Х直媛什患眩詰?yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長度的凝膠,以使樣品不會走出前沿 。樣品的蛋白水解作用也引起擴(kuò)散而使分辨率降低 。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生 。
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