農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法？轉(zhuǎn)化：目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上——進(jìn)入農(nóng)桿菌——導(dǎo)入植物細(xì)胞——目的基因整合到植物染色體的DNA上——目的基因得以穩(wěn)定維持和表達(dá)1、獲取目的基因：用限制性核酸內(nèi)切酶切割下目的基因 。2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：將目的基因與載體（大多數(shù)選用質(zhì)粒）用DNA連接酶連接起來(lái) 。3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：將含目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌（農(nóng)桿菌為受體細(xì)胞） 。4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：用DNA分子雜交技術(shù)/分子雜交技術(shù)/抗原-抗體雜交/個(gè)體生物學(xué)水平鑒定（這個(gè)方法需要導(dǎo)入重組后的細(xì)胞的植物體，詳見(jiàn)第五步） 幾種方法進(jìn)行檢驗(yàn)（根據(jù)要求選取不同方法） 。5、最后將成功表達(dá)的細(xì)胞導(dǎo)入植物體內(nèi)，對(duì)植物體進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平鑒定 。整個(gè)轉(zhuǎn)基因體系的建立步驟大致可以歸納為：目的載體的構(gòu)建---載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化---農(nóng)桿菌與植株共培養(yǎng)---轉(zhuǎn)化植株的篩選---轉(zhuǎn)化植株的鑒定 。在每一步中都涉及到很多的方法與技術(shù) 。目的載體的構(gòu)建，包括目的基因的克隆、載體的酶切、連接(用限制性核酸內(nèi)切酶與DNA連接酶），以及測(cè)序分析 。載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，目前有很成熟的方法，試驗(yàn)中應(yīng)注意熱激和冷激的時(shí)間 。農(nóng)桿菌與植株的共培養(yǎng)，即為植株轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，在溶液中加入促進(jìn)植株愈傷生長(zhǎng)的激素能一定程度提高轉(zhuǎn)化率 。轉(zhuǎn)化植株的篩選，大多是利用抗生素進(jìn)行篩選的，抗生素的選擇則需根據(jù)目的載體確定，設(shè)置不同梯度的抗生素對(duì)植株進(jìn)行篩選 。轉(zhuǎn)化植株的鑒定，一般采用PCR法 。以上所有的操作，都應(yīng)該在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，無(wú)菌是植物組培的一項(xiàng)基本，但是重要的要素 。

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